层析柱使用常见问题盘点

　　“ 层析柱进气泡怎么办？ ”

　　答疑解惑层析柱进气泡有多种可能的原因，对于这些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解决气泡困扰：

　　1.空气进入层析柱（如：缓冲液走空，连接层析柱进入系统过程中等）

　　用纯水反向冲洗层析柱（如有柱位阀可直接切换流向，没有的话可将柱子反接

　　对于大多数层析柱来说可用乙醇冲洗，以提高排除气泡的效率

　　2.缓冲液中有气泡采取预防措施将缓冲液脱气

　　在缓冲液入口使用空气感应器

　　使用限流阀

　　3.温度影响（在冷室操作后紧接着在室温操作或低温缓冲液直接在室温使用）采取预防措施允许缓冲液在使用前达到热平衡

　　“ 层析柱干了还可以再使用吗？ ”

　　答疑解惑通常来说是不可以的，但也取决于您的纯化需求。如果您的层析柱看起来像图中这样，不妨一试。可将溶液以接近填料zui大耐受压力的流速流经层析柱以排除空气。结束之后，进行柱效测定，满足您的要求便可继续使用；如未成功排除气泡，则层析柱需要重装。

　　“ 胶平面与柱头有间隙怎么办？ ”

　　答疑解惑造成间隙的有多种可能的原因，对于这些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解决间隙困扰

　　1.由于不当装填或者筛网孔径与填料粒径不匹配，导致填料漏出

　　更换筛网，重新装填

　　2.层析柱堵塞，导致反压增大

　　根据说明书清洗层析柱

　　更换滤膜采取预防措施澄清样品

　　3.柱床装填太差（装柱过程中未有效压缩填料）

　　调整柱头高度，测柱效

　　4.填料被用于条件，如有机溶剂

　　检查缓冲液选择更加合适的使用条件

　　“ 怎样避免由于样品导致的压力增大 ”

　　答疑解惑不同杂质会带来不同的不良影响，对于这些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解决压力增大困扰

　　1.颗粒性物质——堵塞滤膜和层析柱离心过滤有吸附的小体积样品可用10000 g 离心15分钟

　　细胞裂解液可50000g离心30分钟过滤醋酸纤维素膜或PVDF膜具有zui少的非特异性蛋白吸附

　　选择合适孔径的滤器

　　2.沉淀——聚集体堵塞层析柱

　　过滤

　　通过改变pH，加盐或添加剂稳定样品或减少聚体产生

　　避免机械压力和过高的蛋白浓度

　　3.核酸——过高粘度可能会封闭填料上的配基

　　加入核酸酶

　　使用硫酸链霉素，聚乙烯亚胺或硫酸鱼精蛋白沉淀

　　4.脂类——可能封闭填料上的配基或堵塞滤膜和层析柱

　　离心

　　使用硫酸铵，硫酸葡聚糖或PVP沉淀